广西师范大学学报（自然科学版） ›› 2016, Vol. 34 ›› Issue (4): 121-128.doi: doi:10.16088/j.issn.1001-6600.2016.04.018

• 广西高校优秀中青年骨干教师培养工程论坛 • 上一篇    下一篇

一株转化反式茴香脑产茴香酸菌株的筛选鉴定

王辛艳1,2,申佩弘1,2,华燕飞1,2,李俊芳1,张敏1,武波2,3   

  1. 1. 广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530004;
    2. 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 广西南宁530004;
    3. 广西民族师范学院生物与食品工程学院,广西崇左532200
  • 出版日期:2016-07-18 发布日期:2018-07-23
  • 通讯作者: 武波(1962—),男,广西武宣人,广西民族师范学院教授。E-mail: wubogx@gxu.edu.cn
  • 基金资助:
    2016年度广西高等教育创优计划教学相关项目——优势特色专业项目(优质本科专业);国家重点基础研究发展计划(2010CB126502)

Isolation and Identification of a Strain Capable of Transforming trans-Anethole to Anisic Acid

WANG Xinyan1,2, SHEN Peihong1,2, HUA Yanfei1,2, LI Junfang1, ZHANG Min1, WU Bo2,3   

  1. 1.College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning Guangxi 530003, China;
    2.State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources, Nanning Guangxi 530005, China;
    3.College of Biology and Food Engineering, Guangxi Normal University for Nationalities, Chongzuo Guangxi 532200, China
  • Online:2016-07-18 Published:2018-07-23

PDF (PC)

256

摘要： 经过梯度驯化及富集筛选,从环境样品中分离获得348株能以反式茴香脑为唯一碳源的菌株。通过薄层层析法和反相高效液相法对转化液中的残余反式茴香脑和茴香酸进行定量分析,最后得到一株对反式茴香脑耐受能力和茴香酸产量都较高菌株WGBF9。在含体积分数为10%的反式茴香脑的种子培养基中,菌体的生物量为空白对照的37.42%,在含体积分数为20%反式茴香脑时,生物量也能达到空白对照的26.57%,说明WGBF9对反式茴香脑具有很高的耐受能力。将该菌株接种到复筛培养基中,30 ℃、转速200 r/min的条件下发酵36 h,茴香酸的摩尔生成率为17.9%。经形态学观察、生理生化等实验分析,初步鉴定WGBF9为恶臭假单胞菌A类变种(Pseudomonas putida biotype A)中的一个亚种。

关键词: 恶臭假单胞菌, 反式茴香脑, 茴香酸

Abstract: After the gradient acclimation and enrichment screening, 348 strains were isolated from environmental samples using trans-anethole as the sole carbon source. Through quantitative detection of trans-anethole and anisic acid with the methods of TLC and RP-HPLC, a strain named WGBF9 with the highest tolerance to trans-anethole and maximum yield of anisic acid was obtained. Biomass of strain WGBF9 was 37.42% of the blank control when the seed culture medium contained 10% (v/v) trans-anethole, and the biomass reached 26.57% in the medium with 20% (v/v) trans-anethole, showing that the strain had a high tolerance to the trans-anethole. Anisic acid molar generation rate is 17.9%, when the strain was cultured in the screening secondary medium, with rotate speed of 200 r/min, after 36 h fermentation under 30 ℃. WGBF9 was identified as a subspecies of Pseudomonas putida biotype A based on the analysis of physiological and biochemical experiments.

Key words: Pseudomonas putida, trans-anethole, anisic acid

中图分类号: 

  • Q93
[1] 杨连梅, 刘养清, 赵慧辉, 等. 黄芪药材中黄芪甲苷含量的荧光分光光度法测定[J]. 时珍国医国药, 2010(9): 2272-2273.
[2] SHEN Peihong, SONG Zhangyang, ZHANG Zhenyong, et al. Screening of Burkholderia sp. WGB31 producing anisic acid from anethole and optimization of fermentation conditions[J]. Journal of Basic Microbiology, 2014, 54(11): 1180-1191.
[3] XI L, ZHANG Z, QIAO N, et al. Complete genome sequence of the novel thermophilic polyhydroxyalkanoates producer Aneurinibacillus sp. XH2 isolated from Gudao oilfield in China[J]. Journal of Biotechnology, 2016,227:54-55.
[4] RICKE S C. Perspectives on the use of organic acids and short chain fatty acids as antimicrobials[J]. Poultry Science, 2003, 82(4): 632-639.
[5] KUBOA I, CHENA Q X, NIHEIA K, et al. Tyrosinase inhibition kinetics of anisic acid[J]. Zeitschrift Fur Naturforschung Section C-A Journal of Biosciences, 2003, 58(10): 713-718.
[6] ELSTON T W, PANDIAN A, SMITH G D, et al. Aniracetam does not alter cognitive and affective behavior in adult C57BL/6J mice[J]. PLoS One, 2014, 9(8): e104443.
[7] 胡松花. 乙胺碘呋酮治疗心肌病并心功能不全的临床疗效分析[J]. 中国当代医药, 2013(1):89-90.
[8] AKKASILPA S, OSIRI M, DEESOMCHOK U, et al. The efficacy of combined low dose of allopurinol and benzbromarone compared to standard dose of allopurinol in hyperuricemia[J]. Journal of the Medical Association of Thailand, 2004, 87(9): 1087-1091.
[9] 任进知, 叶晓镭, 江天维. 利托君的合成新路线[J]. 中国医药工业杂志, 2000(6): 3-4.
[10] 周国华, 彭胜石. 茴香酸甲酯的合成[J]. 广西师院学报(自然科学版), 1995(2): 81-83.
[11] 覃认贤. 广西八角产业发展现状及对策[J]. 南方农业, 2014(18): 142-143.
[12] 黄灵杰. 广西八角产业存在的问题及对策分析[J]. 现代园艺, 2015(10): 15.
[13] 唐谦. 间接电解法制备茴香酸[J]. 广西化工, 1988(1): 20-22.
[14] LIAO P, HEMMERLIN A, BACH T J, et al. The potential of the mevalonate pathway for enhanced isoprenoid production[J]. Biotechnology Advances, 2016,34(5):697-713.
[15] REDDY B M, RAO K N, REDDY G K, et al. Characterization and catalytic activity of V2O5/Al2O3-TiO2 for selective oxidation of 4-methylanisole[J]. Journal of Molecular Catalysis A: Chemical, 2006, 253(1/2): 44-51.
[16] SAINT-LARY L, ROY C, PARIS J, et al. Metabolomics for the authentication of natural extracts used in flavors and fragrances: the case study of violet leaf absolutes from Viola odorata[J]. Chemistry & Biodiversity, 2016,13(6):737-747.
[17] 殷勇, 王立升, 洪绍彩, 等. 高锰酸钾氧化茴脑制备茴香酸的工艺研究[J]. 广西大学学报(自然科学版), 2012(3): 421-424.
[18] TAN G, ZHU F, DENG Z, et al. In vitro reconstitution guide for targeted synthetic metabolism of chemicals, nutraceuticals and drug precursors[J]. Synthetic and Systems Biotechnology, 2016,1(1):25-33.
[19] OKAMOTO K, NARAYAMA S, KATSUO A, et al. Biosynthesis of p-anisaldehyde by the white-rot basidiomycete Pleurotus ostreatus[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering, 2002, 93(2): 207-210.
[20] 粟桂娇, 刘雄民, 李伟光, 等. 假单胞菌BT-13生物催化反式茴脑合成茴香酸的条件优化[J]. 高校化学工程学报, 2011(4): 643-649.
[21] SHIMONI E, BAASOV T, RAVID U, et al. Biotransformations of propenylbenzenes by an Arthrobacter sp. and its t-anethole blocked mutants[J]. Journal of Biotechnology, 2003, 105(1/2): 61-70.
[22] 梁肖仍, 宋张杨, 曾华贺, 等. 一株转化茴脑生成茴香醛的菌株筛选与鉴定[J]. 食品与生物技术学报, 2011(6): 956-961.
[23] 蔡妙英, 东秀珠. 常见细菌系统鉴定手册[M]. 北京:科学出版社, 2001.
[24] 布坎南. 伯杰细菌鉴定手册[M]. 北京:科学出版社, 1984.
[25] COCKERILL F R. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: twenty-second informational supplement[M]. Wayne:Clinical and Laboratory Standards Institute, 2013.
[1] 张晓晓, 王苗苗, 冯书珍, 邱虎森, 盖爽爽, 赵蕾, 胡亚军, 何寻阳, 陆祖军. 岩性与植被类型对喀斯特土壤AM真菌群落的影响[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2019, 37(2): 158-167.
[2] 肖咪云, 孙孟龙, 阮楚晋, 陈寿昆, 刘裕华, 陆祖军. 生防细菌2016NX1对病原真菌的抑制及发酵条件优化[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2019, 37(2): 168-178.
[3] 杨莉婷, 何丽, 何海宁, 吴琼. 流式细胞术对生乳中微生物检测的应用研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2017, 35(2): 112-116.
[4] 刘祎, 叶雪梅, 肖咪云, 吕丽君, 侯澄友, 陆祖军. 快速荧光测定初筛高刺桐碱积累量菌株[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2017, 35(3): 141-148.
[5] 黄远洁, 李卫东, 莫肖敏. 植物内生菌透射电镜负染标本制备方法的对比研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2016, 34(3): 127-130.
[6] 江绍锋, 黄金清, 于晓宇, 李云飞, 陆祖军. 产酸克雷伯氏菌基因组文库的构建及鉴定[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2016, 34(2): 151-157.
[7] 蔡文侠, 黄光辉, 王婷婷, 付珊, 何勇强, 姜伟. 水稻细菌性条斑病菌一个假定的udgH基因的功能研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2014, 32(3): 109-115.
[8] 于晓宇, 江绍锋, 蓝运华, 夏樱花, 李云飞, 陆祖军. 对菌根分泌物强趋性产酸克氏菌突变体的筛选[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2014, 32(2): 130-136.
[9] 黄胜, 卢烨, 朱晓琳, 潘俊霞, 何勇强, 姜伟. 水稻细菌性条斑病菌一个新基因与致病相关[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2014, 32(2): 137-142.
[10] 梁任山, 俸祥仁, 刘婷婷, 张杰, 宋德贵. 复合中药代替抗生素治疗猪气喘病的研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2013, 31(3): 209-212.
[11] 李楠, 邓智年, 奉灵波, 周瑞芳, 魏源文, 曹辉庆, 李杨瑞. 甘蔗糖蜜酒精废液产腐殖酸的菌株筛选与鉴定[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2013, 31(2): 87-92.
[12] 王培, 曹建华, 宋德贵, 辜澜涛, 董研玲. 一株产海因酶菌种的筛选与鉴定[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2013, 31(1): 119-124.
[13] 梁宏. 脂肪酸调控盐酸金刚烷结合在人血清白蛋白ⅡA亚域[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2012, 30(3): 159-170.
[14] 姜伟, 吴德波, 林茵, 杨文珊, 倪哲, 何勇强, 黄胜. 水稻白叶枯病菌致病相关基因筛选系统的建立[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2014, 32(4): 135-141.
[15] 肖咪云, 阮楚晋, 陈寿昆, 刘裕华, 陆祖军. 一株产天然蓝色素细菌的分离鉴定[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(4): 131-138.
Viewed
Full text


Abstract

Cited
  Shared   
  Discussed   
[1] 孟春梅, 陆世银, 梁永红, 莫肖敏, 李卫东, 黄远洁, 成晓静, 苏志恒, 郑华. 岩黄连总碱诱导肝星状细胞凋亡和自噬的电镜实验研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 76 -79 .
[2] 李钰慧, 陈泽柠, 黄中豪, 周岐海. 广西弄岗熊猴的雨季活动时间分配[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 80 -86 .
[3] 覃盈盈, 漆光超, 梁士楚. 凤眼莲组织浸提液对靖西海菜花种子萌发的影响[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 87 -92 .
[4] 庄枫红, 马姜明, 张雅君, 苏静, 于方明. 中华水韭对不同光照条件的生理生态响应[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 93 -100 .
[5] 韦宏金, 周喜乐, 金冬梅, 严岳鸿. 湖南蕨类植物增补[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 101 -106 .
[6] 包金萍, 郑连斌, 宇克莉, 宋雪, 田金源, 董文静. 大凉山彝族成人皮褶厚度特征[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 107 -112 .
[7] 林永生, 裴建国, 邹胜章, 杜毓超, 卢丽. 清江下游红层岩溶及其水化学特征[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 113 -120 .
[8] 张茹, 张蓓, 任鸿瑞. 山西轩岗矿区耕地流失时空特征及其影响因子研究[J]. 广西师范大学学报（自然科学版）, 2018, 36(3): 121 -132 .
版权所有 © 广西师范大学学报（自然科学版）编辑部
地址：广西桂林市三里店育才路15号　邮编：541004
电话：0773-5857325　E-mail: gxsdzkb@mailbox.gxnu.edu.cn
本系统由北京玛格泰克科技发展有限公司设计开发